Для всех

18.04.2019

Плюсы и сложности культурального метода

Посев, или культуральный метод. Этот метод в лабораторной диагностике считается «самым-самым». Еще его называют золотым стандартом.

Его смысл заключается в том, что на специальные питательные среды, пригодные для роста микроорганизмов, помещают забранный у пациента материал. Уже через сутки на питательном субстрате вырастает колония микробов. Через 7—10 дней, когда число микробов увеличивается, лаборант смотрит, какая инфекция «выросла». По виду, цвету, форме и консистенции этой колонии можно точно идентифицировать возбудителя.

Также в эту среду можно добавлять разные антибиотики — и смотреть, от какого антибиотика инфекция погибла, а от какого — нет. Таким образом проводится анализ на чувствительность к антибиотикам.

Для посева материал берут из мочеиспускательного канала, шейки матки, влагалища, глотки и прямой кишки.

Этот метод очень точен. Его точность достигает 95—100%. Если с помощью посева удалось выявить возбудителя ЗППП, то можно наверняка сказать, что он есть в организме больного. Если была выявлена чувствительность инфекции к антибиотику, то почти наверняка (при соблюдении назначений и режима врача), инфекция будет излечена. Вот почему микроорганизмов, выявленных культуральным методом, удается уничтожить даже после нескольких случаев безуспешного лечения заболевания.

Однако, увы, в природе не бывает ничего идеального. К сожалению, не все инфекции растут на искусственных средах. Таким образом, посевом (или культуральным методом) возможно вырастить не все инфекции. Второй недостаток — если возбудителя выявить не удалось, этот факт не несет почти никакой диагностической информации. Возможно, инфекции в организме и нет. А возможно, что есть, но микробов не так много: для того чтобы бактерии выросли на питательной среде, требуется достаточно большое их количество. Но заболевание есть, даже если в организме живет только одна бактерия. В этом случае таким методом ее не выявить. Третий недостаток посева — он занимает очень много времени (от 7 до 10 суток). И последний недостаток культурального метода — его высокая стоимость.
http://www.venerologia.policlinica.ru/posev-v-diagnostike-zppp.html

Сложности культурального метода.
Анаэробные и смешанные (анаэробно-аэробные) инфекции представляют одну из самых значительных категорий гнойно-воспалительных заболеваний у человека. Особенно большую роль они играют в развитии заболеваний и осложнений у стоматологических, торакальных, абдоминальных, гинекологических больных и при определенных инфекциях мягких тканей (раневая инфекция). Основная масса инфекций, протекающих с участием анаэробов, имеет как правило, эндогенное происхождение. Возбудители анаэробных инфекций: пептококки, пептострептококки, бактериоды, фузобактерии, эубактерии, клостридии и др., являются представителями нормальной микрофлоры человека. Развитию инфекции способствуют травмы, ожоги, оперативное вмешательство, местное нарушение кровообращения, стресс, голодание, переутомление, хронические заболевания, применение лекарственных препаратов: иммунодепресантов, цитостатиков, антибиотиков, глюкокортикоидов и др.

Для определения анаэробной инфекции при гнойно-септических осложнениях различной локализации проводится посев мокроты, мочи, трахео-бронхиального экссудата, отделяемого гайморовых пазух, содержимого абсцессов, флегмон, глубоких отделов ран и др.

Пункционный материал из очага воспаления вносят в транспортную среду для анаэробных бактерий (возможна доставка материала в шприце, игла должна быть закрыта стерильным колпачком). Доставка образца - в течение 4 ч.

Посев крови производят в специальные среды для гемокультур в КДЦ.

Диагностика анаэробных инфекций проводится также при гинекологических заболеваниях, воспалительных процессах в ротовой полости, инфекциях кожи и мягких тканей. Материал отбирают стерильным ватным тампоном, который помещают в пробирку с транспортной средой для анаэробов. Образец доставляют в лабораторию в течение 4 часов.

Стандартный культуральный метод чаще всего не может полностью охватить все виды микрофлоры кишечника, особенно анаэробные бактерии, которые составляют значительную часть от всей микрофлоры кишечника.

http://www.gabrich.com/science/diagn.htm.html

Однако, несмотря на сложности, некоторые анаэробы всё-таки можно культивировать, хотя транспортировать их намного сложнее.

Для культивирования анаэробных микроорганизмов необходимо создание бескислородных условий, достигаемое различными методами.

Физические методы основаны на создании вакуума в специальных аппаратах — анаэростатах. Иногда воздух в них заменяют каким-либо другим газом, например СО2. Доступ кислорода в питательную среду можно затруднить, если культивировать анаэробов в глубине столбика сахарного агара или среды Вильсона — Блера, налитых в пробирки в расплавленном состоянии и остуженных до 43°С. По методу Вейона — Виньяля расплавленный и остуженный агар с посевным материалом набирают в стеклянные трубочки, которые запаивают с двух концов.

Химические методы заключаются в том, что при культивировании исследуемого материала на плотных средах в эксикатор помещают химические вещества, например пирогаллол и щелочь, реакция между которыми идет с поглощением кислорода. В жидкие питательные среды можно добавлять различные редуцирующие вещества: аскорбиновую или тиогликолевую кислоту.

Биологический метод основан на одновременном культивировании аэробов и анаэробов на плотных питательных средах в чашках Петри, герметически закупоренных. Вначале кислород поглощается растущими аэробами, посеянными на одной половине среды, а затем начинается рост анаэробов, посев которых сделан на другой половине. Наиболее удобна для культивирования анаэробов специальная среда Китта — Тароцци. В нее входят сахарный МПБ, который наливают в пробирки в количестве 10—12 мл, и кусочки вареных паренхиматозных органов. Перед употреблением среду Китта — Тароцци кипятят на водяной бане для удаления растворенного в ней кислорода. Среду заливают сверху стерильным вазелиновым маслом. Заметный рост анаэробов (помутнение) может наблюдаться через 48 ч и более в зависимости от количества посевного материала.

Рост изолированных колоний анаэробов можно получить при рассеве исследуемого материала по поверхности кровяно-сахарного агара, разлитого в чашки Петри. После посева чашки помещают в анаэростат. Исследуемый материал в убывающей концентрации можно засевать в высокий столбик агара. Образовавшиеся отдельные колонии анаэробов выделяют, распилив пробирку в месте роста. Колонии анаэробов для получения значительного количества биомассы отсевают затем на среду Китта — Тароцци. В качестве источника энергии для анаэробов используют глюкозу, добавление которой в питательную среду обязательно. 

http://microbiology.ucoz.org/index/metody_kultivirovanija_anaehrobov/0-34

Начало активности (дата): 18.04.2019 11:02:00